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Mar 18, 2023

Gli analoghi del 25OHD e le provette per la raccolta del sangue sottovuoto influiscono notevolmente sull'accuratezza dei test immunologici automatizzati

Scientific Reports volume 5,

Scientific Reports volume 5, numero articolo: 14636 (2015) Citare questo articolo

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Le variazioni nei metodi di quantificazione della vitamina D sono ampie e le influenze degli analoghi della vitamina D e dei metodi di raccolta del sangue non sono state esaminate sistematicamente. Abbiamo valutato gli effetti degli analoghi della vitamina D 25OHD2 e 3-epi 25OHD3 e dei metodi di prelievo del sangue sulla misurazione della vitamina D, utilizzando cinque sistemi di dosaggio immunologico e cromatografia liquida-spettrometria di massa tandem (LC-MS/MS). Campioni di siero (332) sono stati selezionati dalle richieste di analisi di routine della vitamina D, inclusi campioni con o senza 25OHD2 o 3-epi 25OHD3 e analizzati utilizzando vari sistemi di dosaggio immunologico. Nei campioni senza 25OHD2 o 3-epi 25OHD3, tutti i test immunologici erano ben correlati con LC-MS/MS. Tuttavia, il sistema Siemens ha prodotto un ampio bias medio positivo di 12,5 ng/mL e un valore Kappa scarso quando si utilizzano provette con attivatore di coagulazione e separatore di gel. Quando erano presenti 25OHD2 o 3-epi 25OHD3, le correlazioni e l'accordo clinico diminuivano per tutti i test immunologici. Il siero 25OHD nelle provette VACUETTE con gel e attivatore della coagulazione, misurato dal sistema Siemens, ha prodotto valori significativamente più elevati rispetto ai campioni raccolti nelle provette VACUETTE senza additivi. Il bias è diminuito e la concordanza clinica è migliorata significativamente quando si utilizzavano provette senza additivi. In conclusione, la maggior parte dei test immunologici automatizzati ha mostrato una correlazione e un accordo accettabili con LC-MS/MS; tuttavia, gli analoghi del 25OHD e le provette per il prelievo del sangue hanno influenzato notevolmente la precisione.

Recenti prove dell’associazione tra vitamina D e malattie ossee1, diabete2, malattie autoimmuni3, malattie cardiovascolari4 e cancro5, insieme al riconoscimento che la carenza di vitamina D è comune, hanno portato a un massiccio aumento dei test della vitamina D in tutto il mondo1,6,7. Ad esempio, presso la clinica Mayo, i test per la carenza di vitamina D sono aumentati dell’80%-90% all’anno6 e nel nostro laboratorio il numero di test forniti è raddoppiato negli ultimi due anni. A causa di questo aumento del carico di lavoro, recentemente sono stati sviluppati test immunologici automatizzati. Tuttavia, esiste un’ampia variazione tra i metodi utilizzati per testare i livelli di vitamina D6,8,9.

La 25 idrossivitamina D circolante (25OHD) è la forma predominante di vitamina D ed è generalmente considerata il biomarcatore più affidabile della concentrazione sierica di vitamina D10. 25OHD3 e 25OHD2 sono i due tipi principali di 25OHD: 25OHD3 è prodotto endogenamente nella pelle degli animali in risposta all'esposizione solare e può essere ottenuto nella dieta attraverso integratori contenenti 25OHD3. 25OHD2 si trova nei funghi. Sia il 25OHD2 che il D3 possono essere utilizzati negli integratori o come additivi negli alimenti come i latticini1. Tuttavia, recentemente è stato identificato il 3-epi 25OHD3, un epimero di 25OHD3. Sebbene la bioattività di questo analogo non sia ancora chiara11,12, è stato dimostrato che 3-epi 25OHD3 causa reattività crociata con 25OHD3 nei test immunologici, portando a una sovrastima dei livelli di 25OHD.

Sono stati sviluppati vari test immunologici automatizzati per il rilevamento del 25OHD. Tuttavia, è stato riportato che la variazione tra laboratori raggiunge il 38%6,8,13. Inoltre, la definizione di carenza di vitamina D è ancora controversa, con ampie variazioni tra i metodi che contribuiscono alla controversia. Si prevede che variazioni così ampie possano essere problematiche anche per le applicazioni diagnostiche cliniche che utilizzano lo stesso cut-off per la carenza di vitamina D per metodi diversi. Pertanto, dovrebbe essere valutata l’uniformità clinica dei diversi metodi.

La cromatografia liquida a diluizione isotopica e la spettrometria di massa tandem (LC-MS/MS) sono considerate il gold standard e il metodo di riferimento per i test 25OHD14. Tuttavia, gli approcci LC-MS/MS più comunemente utilizzati e quelli che hanno costituito la base per il confronto dei metodi non hanno incluso la separazione di 3-epi 25OHD3 da 25OHD3 perché richiederebbe un'analisi dispendiosa in termini di tempo tramite cromatografia, che ridurrebbe l'efficienza di rilevamento; solo in studi isolati è stato misurato 3-epi 25OHD3 utilizzando LC-MS/MS14,15.